CHROMOBRIT IU
Medio de cultivo cromogénico que permite el aislamiento, recuento de colonias, identificación presuntiva y detección simultánea de cultivos mixtos en muestras del tracto urinario
Fundamento
Las infecciones urinarias, constituyen una de las causas mas frecuentes de consulta médica. Si a ello se une el incremento de la resistencia a los antimicrobianos observada entre los patógenos urinarios, es indudable la necesidad de realizar en forma sistemática urocultivos para conocer el agente etiológico y efectuar el antibiograma. Por tal motivo, los urocultivos, representan hoy en día, la práctica mas frecuente que realiza el laboratorio de microbiología.Como medios de cultivo para realizar el urocultivo, se ha aconsejado usar el agar sangre y el agar Mac Conkey, y en Europa y nuestro país, está mas extendido el uso del medio CLDE (Cistina Lactosa Deficiente en Electrolitos).
Si bien el agar sangre se considera el medio óptimo para el aislamiento y recuento de colonias en orina, solo permite muy poca diferenciación entre los microorganismos aislados y falla completamente cuando crecen cepas de Proteus invasoras.
Los medios de cultivo diferenciales (por ejemplo CLDE o Mac Conkey), detectan caracteres fenotípicos bacterianos que ponen de manifiesto la presencia de enzimas características de grupos taxonómicos, y orientan hacia la identificación presuntiva de las colonias bacterianas desarrolladas en ellos, aunque la identificación definitiva de cada colonia, suele requerir su aislamiento y la realización de pruebas bioquímicas adicionales.
El medio CLDE y el Agar Mac Conkey, impiden la invasión de Proteus spp., pero su capacidad diferencial es pequeña, pues solo diferencia las colonias fermentadoras de lactosa de las no fermentadoras.
En los últimos años, se han producido avances importantes en la formulación de los medios de cultivo diferenciales con la aparición de medios cromogénicos. Estos medios incluyen en su composición sustratos cromogénicos de enzimas específicas bacterianas.
Cuando la enzima actúa sobre estos cromógenos, estos sufren un cambio en su estructura, formándose una nueva estructura molecular coloreada. La interacción entre los microorganismos y los sustratos cromogénicos, depende del tipo de sustrato usado, pues la sustancia coloreada producida puede quedar absorbida en el interior de la célula bacteriana coloreando la colonia o difundir en el medio de cultivo produciendo un cambio de color en éste. Laboratorios Britania s.a., presenta el nuevo producto: Chromobrit IU, donde a un medio basal, se agrega una mezcla de sustratos cromogénicos para detectar en forma simultánea diversas actividades enzimáticas en un mismo medio, lo que permite la identificación presuntiva directa con un mínimo de pruebas adicionales de la mayoría de las bacterias causantes de infección urinaria. Entre las bacterias mas comúnmente aisladas en las infecciones urinarias, se encuentran Escherichia coli, otros miembros de la familia Enterobacteriaceae y Enterococcus spp. Por ello, idealmente los medios para urocultivo, deben permitir la identificación directa de estas bacterias y el crecimiento de los restantes uropatógenos que no sean identificados directamente por su crecimiento como colonias típicas en el medio usado (por ejemplo Staphylococcus spp., Pseudomonas spp.) de manera que puedan ser subcultivadas para su identificación posterior. En el medio Chromobrit IU, se puede poner de manifiesto en las colonias la actividad glucosidasa y glucuronidasa, pudiendo estudiar directamente sobre las colonias la detección de indol si es necesario y la presencia de actividad triptofano desaminasa. La detección de estas actividades enzimáticas, junto con la morfología de la colonia, permite reconocer presuntivamente a:-E. coli (β glucuronidasa positivo, indol positivo).
-Grupo KES (β glucosidasa positivo)
-Enterococcus spp. (β glucosidasa positivo)
-Proteus, Morganella, Providencia (triptofano deaminasa positivo) y además Proteus vulgaris (indol positivo).
En el medio de cultivo, el extracto de levadura, la peptona de carne y la tripteína aportan los nutrientes necesarios para el adecuado desarrollo bacteriano. Además la tripteína y el L-triptofano aportan el sustrato para la enzima triptofanasa y triptofano deaminasa.
El almidón es la fuente de glucosa, hidrato de carbono fermentable, el piruvato de sodio presente permite reparar células injuriadas y el citrato de hierro y amonio, permite la detección de la enzima triptofano deaminasa, presente en la tribu Proteae.
La presencia de la mezcla cromogénica, permite la diferenciación simultánea de Escherichia coli, grupo KES, Enterococcus spp.
Es propio de Escherichia coli la presencia de la enzima β glucuronidasa, la cual actúa sobre el sustrato cromogénico presente en el medio de cultivo y se libera un compuesto de color verdoso.
Enterococcus spp. y las bacterias del grupo KES, presentan la enzima β glucosidasa la cual actúa sobre el sustrato cromogénico presente en el medio y se libera un compuesto de color rosado.
Fórmula (en gramos por litro)
Instrucciones
Almidón
1.0
Fundir los frascos del medio sólido en baño
María a ebullición. Distribuir aproximadamente 15 ml por placa. Las placas son ligeramente opalescentes, guardarlas a 2-8 ºC al abrigo de la luz.
Extracto de levadura
6.0
Peptona de carne
6.0
Tripteína
14.0
L-triptofano
1.0
Piruvato de sodio
1.0
Citrato de hierro y amonio
0.02
Mezcla cromogénica
0.2
Agar
15.0
pH final: 6.9 ± 0.2
Siembra
Directa, estriando la superficie del medio. Utilizar las Ansas Calibradas marca Britania (Código B1655330)Incubación
Se incuban las placas 18-24 horas a 35-37 ºC, en aerobiosis.Resultados
Efectuar el recuento de colonias y tener en cuenta la alícuota de muestra sembrada para realizar el cálculo de UFC/ml. La detección de la actividad enzimática bacteriana, junto con la morfología de la colonia, permite reconocer presuntivamente a:E. coli: colonias verdes.
β glucuronidasa: positivo.
β glucosidasa: negativo.Nota: entre el 95-98 % de las cepas de Escherichia coli presentan la enzima β glucuronidasa.
Grupo KES (Klebsiella, Enterobacter, Serratia):colonias rosadas.
β glucuronidasa: negativo.
β glucosidasa: positivo.Enterococcus spp.: colonias pequeñas rosadas.
β glucuronidasa: negativo.
β glucosidasa: positivo.Proteus-Morganella-Providencia: colonias amarronadas.
Triptofano deaminasa: positivo.
β glucuronidasa: negativo.
β glucosidasa: negativo.
Indol positivo:Proteus vulgaris, Morganella spp., Providencia spp.
Indol negativo: Proteus mirabilis.Pseudomonas aeruginosa: colonias blancas o pigmentadas.
Staphylococcus aureus: colonias blancas-amarillentas.
Streptococcus agalactiae : colonias pequeñas generalmente verdosas.
Candida spp: colonias blancas.
Importante: con excepción de Escherichia coli β glucuronidasa positivo, es necesario realizar pruebas bioquímicas adicionales para la identificación definitiva del microorganismo hallado.
Control de Calidad
Microorganismos
Características y color de las colonias
E. coli ATCC 25922
Colonias con centro verde
E. coli ATCC 35218
Colonias con centro verde
E. coli H7O157 ATCC 700728
Colonias blancas
Klebsiella pneumoniae ATCC 700603
Colonias con centro rosado
E. cloacae ATCC 13047
Colonias rosadas
S. marcescens ATCC 13880
Colonias rosas pigmentadas
E. faecalis ATCC 29212
Colonias pequeñas rosadas
S. aureus ATCC 25923
Colonias medianas, blanco rosadas
S. agalactiae ATCC 13813
Colonias pequeñas verdes
P. mirabilis ATCC 43071
Colonias amarronadas
P. aeruginosa ATCC 27853
Colonias blancas
C. albicans ATCC 10231
Colonias blancas
Limitaciones
-Entre el 95-98 % de las cepas de Escherichia coli presentan la enzima β glucuronidasa.
-Algunas cepas de Salmonella spp., Shigella spp., Citrobacter freundii y Yersinia spp. presentan la enzima β glucuronidasa.
- En el caso que se quiera realizar la prueba de indol, utilizar el reactivo p-dimetilaminocinamaldehido.
- En el caso que se quiera realizar la prueba de la triptofano deaminasa, utilizar el reactivo fenilalanina (código: B1550461).Características del medio
Medio preparado: ámbar.
Almacenamiento:
Medio preparado: a 10-35 ºC
Presentación
6 x 50 ml
B04-215-84
12 x 100 ml
B04-215-92