Monodiscos de Acido Borónico 300 ug

Utilizados en las pruebas de sensibilidad a los antimicrobianos para la detección de enzimas β-lactamasas tipo AmpC.

Fundamento

La producción de enzimas β-lactamasas es el principal mecanismo de resistencia a los antibióticos β-lactámicos en bacilos Gram negativos.

Las β-actamasas tipo AmpC pertenecen al grupo 1 según la clasificación de Bush et al (clase C de Ambler). Son cefalosporinasas pobremente inhibidas por ácido clavulánico y sulbactam, pero son inhibidas de manera específica y reversible por el ácido borónico.

Estas enzimas son de importancia clínica porque confieren resistencia a una variedad de antibióticos β-lactámicos incluyendo las aminopenicilinas, aminopenicilinas/inhibidor, cefalosporinas de primera generación y cefamicinas. Además, cuando son producidas en alta cantidad (hiperproducción), también confieren resistencia a las oxiiminocefalosporinas (cefalosporinas de tercera generación).

Ciertas enterobacterias, tales como Enterobacter cloacae, Enterobacter aerogenes, Citrobacter freundii, Morganella morganii, naturalmente expresan en forma inducible estas enzimas, codificadas a nivel cromosómico.

A fines de la década de 1980 se reportó la existencia de β-lactamasas tipo AmpC plasmidicas en otras enterobacterias, como ser Klebsiella pneumoniae, Escherichia coli, Proteus mirabilis, Salmonella spp.

Aunque la resistencia a las cefamicinas (cefoxitina), en bacterias sin β-lactamasa AmpC cromosómica, puede sugerir la presencia de β-lactamasa tipo AmpC plasmídica, también puede deberse a una reducción en la permeabilidad de la membrana externa. Asimismo, la resistencia a cefalosporinas de tercera generación podría deberse a hiperproducción de AmpC o a la presencia de β-lactamasas de espectro extendido (BLEE). Cada uno de estos posibles mecanismos tiene distintas implicancias terapéuticas y epidemiológicas.

Por ello, disponer de métodos fenotípicos, rápidos, prácticos y simples, para detectar microorganismos que poseen estas enzimas es de enorme utilidad, tanto en estudios de vigilancia como para control de infección y evitar brotes nosocomiales.

Metodología de empleo de los discos de ácido borónico 300 ug

“Método de Difusión en Agar Mueller Hinton según normas CLSI” (*)

Para la detección de enzimas β-lactamasas AmpC, se sigue el método de la Doble Difusión de Discos, que se describe a continuación:

Interpretación: una prueba positiva consiste en la observación del agrandamiento de la zona de inhibición del desarrollo alrededor del antibiótico β-lactámico hacia el disco de acido borónico (a este fenómeno de agrandamiento, se lo llama comúnmente “Efecto Huevo”).

Una prueba negativa se considera cuando hay ausencia de agrandamiento de la zona de inhibición del desarrollo alrededor del disco de antibiótico β-lactámico hacia el disco de ácido borónico.


Almacenamiento

Entre -20 y 0°C para mantener su potencia. Las cantidades necesarias para el trabajo semanal (7 días) pueden mantenerse refrigeradas entre 2-8 °C.

Permita que los recipientes alcancen la temperatura 10-35 ºC antes de abrirlos.

Presentación 

X 50 Discos     

Código:   B12-416-27

(*) “Método de Difusión en Agar Mueller Hinton según normas CLSI”

Preparación de las placas con el medio de cultivo:

Muestra:

Condiciones de los cultivos originales: el antibiograma se realiza a partir de cultivos monomicrobianos de la cepa en estudio.

El tubo testigo se prepara añadiendo 0.5ml de 0.048 M BaCl2 (1.175 % p/v BaCl2 2 H2O) a 99.5 ml de 0.36 NH2SO4 (1% v/v). La turbidez se verifica en un espectrofotómetro con haz de luz de 1cm en la cubeta correspondiente y la lectura deberá ser a 0.08 a 0.13 unidades de absorbancia a 625 nm.

Siembra en Placas:

La suspensión bacteriana obtenida como se indicó en el paso anterior (b) es absorbida con un hisopo de algodón. El exceso de líquido se descarta oprimiendo el algodón contra la pared del tubo. Se inocula la superficie seca del agar Mueller Hinton por hisopado en tres direcciones rotando la placa 60 º cada vez, para asegurar una completa distribución del inóculo. Se dejan secar las placas de 3 a 5 minutos antes de proceder a aplicar los discos.

Aplicación de los discos:

Se aplican sobre la superficie del agar, con la ayuda de una pinza. Se debe tener el cuidado que los discos hagan buen contacto con dicha superficie, ejerciendo para ello ligera presión sobre los mismos. Transcurridos 15 minutos de la aplicación de los discos, las placas se incuban invertidas en la estufa a 35-37 ºC durante toda la noche (18-24 horas).

-Referencias bibliográficas cuyo contenido fundamenta las informaciones provistas: